بیان پروتئین نوترکیب هپسیدین در میزبان باکتریایی با رویکرد تسهیل در فرایند خالص سازی

چکیده هپسیدین یک هورمون پپتیدی کوچک غنی از سیستئین و دارای چهار پیوند دی سولفیدی است. این هورمون اغلب در سلول های کبدی بیان شده و در بدن دارای دو عملکرد اصلی است: 1) فعالیت ضدمیکروبی 2) حفظ هموستاز آهن خون. هپسیدین به دلیل داشتن پیوندهای دی سولفید غیرمعمول به عنوان گروه جدیدی از پپتیدهای ضدمیکروبی معرفی شده است. این پپتید دوگانه-دوست، از طریق چسبیدن به دیواره ی سلولی تعدادی از باکتری های گرم مثبت و گرم منفی و دیواره ی قارچ ها ایفای نقش می کند. هدف از این مطالعه: طراحی، سنتز، همسانه سازی و ارزیابی بیان پروتئین نوترکیب هپسیدین انسانی است. در این پژوهش ژن هپسیدین انسانی، جهت بیان بیشتر در سویه ی origami باکتری e.coli، بهینه سازی شد و به ژن سومو متصل گردید. سومو، پروتئینی با خاصیت چاپرونی است که تاخوردگی مناسب پروتئین هپسیدین را تسهیل کرده و حلالیت آن را افزایش می دهد، سپس توالی sumo_hepcidin در وکتور (+)pet-32a همسانه سازی گردید و به سلول های باکتریایی (e.coli origami)، انتقال یافت. باکتری ها در محیط کشت لوریا برتانی، تحت القای iptg با غلظت نهایی یک میلی مولار در 30 درجه سانتی گراد رشد کردند و در نهایت، پروتئین ترکیبی در باکتری origami e.coli بیان شد. پروتئین ترکیبی با وزن مولکولی حدود 35 کیلودالتون روی ژل sds-page آنالیز شد و توسط تکنیک وسترن بلاتینگ و دات بلاتینگ صحت حضور آن تاًیید گردید. بیشترین بیان در 6 ساعت پس از القا با iptg، روی ژل sds-page مشاهده گردید و نتایج وسترن بلات و دات بلات نشان داد که پروتئین نوترکیب، به طور اختصاصی به آنتی بادی mouse anti-6(his) peroxidase متصل گردیده است.